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点击次数：2840 发布时间：2018/1/26 15:46:35
在Mg2 和ATP存在下，T4 DNA连接酶能催化载体分子的粘性末端与外源DNA的相同粘性末端联接成重组DNA分子。
1. T4 DNA 连接酶
2. 连接酶缓冲液
3. 无菌ddH2O
1. 旋涡混合器
2. 微量移液取样器
3. 移液器吸头
4. 1.5ml 微量离心管
5. 双面微量离心管架
6. 台式离心机
7. 干式恒温气浴
1. pUCm-T 载体
2. Pinpoint™xa-3酶切载体
3. CHI插入片断
1. PCR产物与pUCm-T载体直接连接
1) 事先将干式恒温仪(或冰盒里的水)温度设定在14～16°C。
2) 取一个灭菌的0.2ml微量离心管，加入：
4μl PCR 产物混合液
1μl pUCm-T载体
0.5μl T4 DNA连接酶(TAKARA, 350U/ul)
1μl 连接酶缓冲液
3.5μl ddH2O
总量 10μl 体系
3) 上述混合液轻轻震荡后再短暂离心，然后置于16°C水中保温过夜。
4) 连接后的产物可以立即用来转化感受态细胞或置4°C冰箱备用。
2. DNA回收片断(CHI)与载体(Pinpoint™xa-3)连接
1) 取一个灭菌的0.2ml微量离心管，加入
4μl 回收DNA片断
1μl 酶切后回收的载体
0.5μl T4 DNA连接酶(TAKARA, 350U/ul)
1μl 连接酶缓冲液
3.5μl ddH2O
总量 10μl 体系
2) 上述混合液轻轻震荡后再短暂离心，然后置于16°C干式恒温仪(或16°C水中)中保温过夜。
3) 连接后的产物可以立即用来转化感受态细胞或置4°C冰箱备用。
在Mg2 和ATP存在下，T4 DNA连接酶能催化载体分子的粘性末端与外源DNA的相同粘性末端联接成重组DNA分子。
1. T4 DNA 连接酶
2. 连接酶缓冲液
3. 无菌ddH2O
1. 旋涡混合器
2. 微量移液取样器
3. 移液器吸头
4. 1.5ml 微量离心管
5. 双面微量离心管架
6. 台式离心机
7. 干式恒温气浴
1. pUCm-T 载体
2. Pinpoint™xa-3酶切载体
3. CHI插入片断
1. PCR产物与pUCm-T载体直接连接
1) 事先将干式恒温仪(或冰盒里的水)温度设定在14～16°C。
2) 取一个灭菌的0.2ml微量离心管，加入：
4μl PCR 产物混合液
1μl pUCm-T载体
0.5μl T4 DNA连接酶(TAKARA, 350U/ul)
1μl 连接酶缓冲液
3.5μl ddH2O
总量 10μl 体系
3) 上述混合液轻轻震荡后再短暂离心，然后置于16°C水中保温过夜。
4) 连接后的产物可以立即用来转化感受态细胞或置4°C冰箱备用。
2. DNA回收片断(CHI)与载体(Pinpoint™xa-3)连接
1) 取一个灭菌的0.2ml微量离心管，加入
4μl 回收DNA片断
1μl 酶切后回收的载体
0.5μl T4 DNA连接酶(TAKARA, 350U/ul)
1μl 连接酶缓冲液
3.5μl ddH2O
总量 10μl 体系
2) 上述混合液轻轻震荡后再短暂离心，然后置于16°C干式恒温仪(或16°C水中)中保温过夜。
3) 连接后的产物可以立即用来转化感受态细胞或置4°C冰箱备用。
原创作者：上海信裕生物科技有限公司
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