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ELISA试剂盒实验总结

点击次数：1154 发布时间：2018/3/26 15:47:51

elisa试剂盒实验总结

ELISA试剂盒包被原的性质很重要，蛋白浓度，是不是降解，这联络到你做出的抗体可不可以被其辨认，所以保管抗原很重要，我做重组蛋白时，师兄都严峻警告我必定要在冰浴下缓慢融化就是这个道理。还有有的包被原可以不是蛋白，关于生物素和脂类物质或小分子物质咱们要事前对其改造再加以包被，列出如下:
①亲和素生物素:先亲和素先包被载体，参与生物素化的DNA，这种包被方法均匀、健壮，已扩展应用于各种抗原物质的定量测定。
②ELISA试剂盒脂类物质:可将其在有机溶剂（例如乙醇）ELISA试剂盒中溶解后参与ELISA板孔中，开盖置冰箱或冷风吹干，待酒精蒸发后，让脂质天然干固在固相表面。
③小分子有必要依托和大的蛋白载体偶联后才华固定在固相载体上。
包被液的选择，一般选择ph9.6的碳酸盐缓冲液。但有时因为实验的需求，包被原的特殊性也可以选用中性的缓冲溶液来包。应留神以下原理：因为蛋白质与聚苯乙烯固相载体是通过物理吸附联络的，靠的是蛋白质分子结构上的疏水基团与固相载体表面的疏水基团间的作用，这种物理吸附对错特异性的，受蛋白质的分子量、等电点、浓度等的影响，大分子蛋白质较小分子蛋白质一般富含更多的疏水基团，故更易吸附到固相载体表面。具体的实验还要有安靖的理论外也要实习，看一下结束可不可以应用到自个实验当中去。常用的包被液除了方才说到的pH9.6碳酸盐缓冲液，还有pH7.2的磷酸盐缓冲液和pH7-8的Tris-HCL缓冲液等等。
ELISA试剂盒封闭：继包被之后用高浓度的无关蛋白质溶液再包被的进程。封闭就是让许多不相关的蛋白质充填这些空位，然后架空ELISA后的过程中搅扰物质的再吸附。常有：0.05%-0.5%的小牛血清或1%明胶;脱脂奶粉，对比价廉，可以高浓度运用（5%-10%）;还有一些稀有用到的各种动物血清（首要为了打扫类似蛋白搅扰）和酪蛋白等等。但结束选用啥，要根据实验具体来实习。