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原产地：中国大陆发布时间：2016/9/2 15:37:44
采购度：152
NCI-H2087细胞,人非小细胞肺癌细胞培养的质量好坏是细胞相关实验的基石，许多朋友都曾经历过因为细胞污染影响实验进度的郁闷，被老板批评是小事，要是影响到正常毕业就是大事了。怎么分辨细胞污染，是不是细胞污染？是那种细胞污染？细胞污染后如何处理？
预防污染
细胞培养是个细致活儿，一不小心就会造成污染，养成良好无菌操作习惯。个人经验是，进实验室之前洗手，很多实验者都不bother，这是国人研究者的一种极端错误，我告诉大家，你仔细洗手比喷酒精效果还好。的是肥皂/香皂仔仔细细的洗手，一直到手腕，指甲缝都要洗。洗两遍是一个不错的选择。实验必备白大褂，而且一定要是长袖，袖口扎紧的那种，如果不能的话，把袖口窝向手臂。裸露的手腕部分一定也要喷酒精。是戴上手套后手请避免接触工作台外面，如果不得已接触，那再喷酒精。
NCI-H2087细胞,人非小细胞肺癌细胞实验前，超净台/实验间紫外照射30min，细胞培养室有24h的空气消毒装置更好了。操作前70％ 酒精擦超净台消毒，酒精擦手，擦培养瓶，擦培养基瓶以及各种瓶子的口，总之，所有进超净台的物品都用酒精擦拭一遍。拿培养瓶和培养液时候尽量托下面 拿，切忌不要拿瓶颈部位。有一点要注意的是，超净台里面的东西一定要尽量少放，东西太多活影响超净台内空气流通及空气除菌。实验过程中尽量避免打闹说笑。
每天观察细胞状态，一旦发现细胞不对劲（比如生长缓慢）立即进行处理。一些刚接触细胞的朋友可能有时拿不准情况，也迫切的希望得到帮助。怎么分辨细胞污染，是不是细胞污染？是那种细胞污染？细胞污染后如何处理？
细胞污染鉴别方法
NCI-H2087细胞,人非小细胞肺癌细胞这里告诉您判断污染的方法：如果是细菌污染，应该很快培基就浑浊了。如果是真菌感染，特 别是初期感染，在低倍镜下可以看到小黑点，特别是成团的小黑点，要特别注意。如果无法确定，就换高倍镜，如果是死细胞，高倍镜下就可以分辨，而真菌高倍镜 下仍然是小黑点。有些（比如支原体）污染，镜检是看不到的，但是细胞的生长异常。所以如果细胞生长异常，那么请扔掉，同时由于支原体空气传播，请检查自己 的培养液和培养箱是不是污染。白色念珠菌是人体霉菌感染的常见霉菌种类，尽管我们有时感觉不到，但它就在你我的身边甚至身上存在着。霉菌污染多来自空气， 所以做实验时说话聊天，或瓶口敞开时间太长，还有培养箱开关频繁是主要原因，应多找自身原因。培养箱水盘一个星期用酒精或0.2％的新吉灭擦一次，如果有紫外线照射就更好了
一旦细胞污染了，怎么解决呢？当然如果你的细胞仍有富余或者冻存的，我还是建议你把污染 的扔掉，再复苏方便省事。如果不幸没有，就不得不救活细胞了。对于细菌污染（常见为金黄色葡萄球菌和大肠杆菌），可以用普通双抗（链霉素和青霉素）处理； 若为霉菌或者真菌污染，加入两性霉素B清洗和培养，NCI-H2087细胞,人非小细胞肺癌细胞终浓度一般为2.5μg/ml（在30μg/ml时会有细胞毒性）。另外也可以选择在培养基里加3ug/ml的制霉菌素或放线菌素D。若为支原体或者黑胶虫污染，因为这个太难处理，处理的代价更大更麻烦，建议直接扔掉算了。以免造成实验室其他污染就得不偿失了。
对于贴壁生长的细胞，相对来说比较简单但很麻烦。以下我主要讨论贴壁生长的细胞。洁净区，并不是没有细菌，而是细菌的数量非常少，国家标准100级的洁净标准是浮游菌数不得超过5个每立方米，沉降菌数不得超过1个每培养皿。而国外的标准比我国的还要高一点，要求的数量更少。所以在我们的洁净操作台里，并不是真正一个细菌都没有的，所以在操作的时候还是要尽量利索迅速地完成操作。尽量减少进入培养体系细菌的数量。所以处理细菌污染的重要原则就是：无限地稀释细菌的浓度，无限地减少细菌的数量！
1）将污染的培养液倒掉，转烧瓶口，加入10mlPBS，适当晃动清洗培养瓶，然后倒掉。转烧瓶口。
2）继续加入10mlPBS，同样方法晃动，清洗培养瓶，然后倒掉。
3）继续加入5mlPBS，同样方法洗瓶，主要是培养面，然后倒掉。
4）重复步骤3再洗。
5）重复步骤3再洗。
6）加入3-5ml双抗，洗瓶，静置3-5分钟，然后吸出。
7）加入3ml双抗，洗瓶，静置3-5分钟，然后吸出。
8）再加入5mlPBS洗瓶，然后吸出。
9）加入10ml培养液，加入2ml双抗，放置培养箱培养，5小时之后，倒掉培养基，加入PBS洗瓶两次，然后加入胰酶消化，吹打后置于离心机800-1000r/min离心，然后洗一次。置于新的培养瓶里培养，培养体系加入2ml双抗。
10）24h之后，视情况换液，若仍然污染严重，培养基浑浊，重复以上步骤，若看不到污染物，则继续步骤1)、3）、4）、6）、8），然后加入培养液培养，培养体系加入2ml双抗.
11）24h之后，若仍污染严重，可再重复一次，若还污染只能弃之（不过一般没有出现这种情况），若镜下不见污染物，则换液PBS洗瓶，正常培养。
NCI-H2087细胞,人非小细胞肺癌细胞很多人有个误区，认为进口血清都是贵，其实不然。GIBCO的NCS，马血清，都比国产的便宜的多，质量好的多。只有FBS才很贵，很多时候国产血清往往是污染源，所以用国产血清要严格监控状态。
以上方法主要是针对贴壁生长的细胞，在操作的过程中，一定要小心操作动作，轻柔缓慢，切忌大动作鲁莽。防止细胞脱落。以上方法操作得当，基本上都能救活你的细胞。这个拯救细胞还是主要针对你就只剩这一瓶细胞无路可退的时候。
大隐静脉平滑肌细胞Saphenous vein smooth musclecells
冠状动脉平滑肌细胞Coronary artery smooth musclecells
大隐静脉内皮细胞Saphenous vein endothelial cells
冠状动脉内皮细胞Coronary artery endothelialcells
大鼠心肌细胞(成年)
大鼠心肌细胞(新生大鼠)
大鼠血管外膜成纤维细胞
食管上皮细胞Esophageal epithelial cells
食管平滑肌细胞细胞Esophageal smooth muscle cellsof the cell
肠平滑肌细胞Intestinal smooth muscle cells
肠粘膜上皮细胞Intestinal mucosa epithelialcells
肠动脉内皮细胞Im artery endothelial cells
肠静脉内皮细胞Im venous endothelial cells
肝实质细胞The liver parenchyma cells
肝动脉内皮细胞Hepatic artery endothelial cells
肝动脉平滑肌细胞Hepatic artery smooth musclecells
肝内胆管上皮细胞Intrahepatic biliary epithelialcells
胃粘膜上皮细胞Gastric epithelial cells
肝窦内皮细胞Sinusoidal endothelial cells
肝星形细胞Hepatic stellate cells
直肠平滑肌细胞Rectal smooth muscle cells
小肠平滑肌细胞Intestinal smooth muscle cells
结肠平滑肌细胞Colonic smooth muscle cells
更新时间：2024/4/10 10:57:02
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