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大鼠前脂肪细胞传代培养
细胞在培养瓶长成致密单层后,已基本上饱和,为使细胞能继续生长,同时也将细胞数量扩大,就必须进行传代,再培养,传代培养也是一种将细胞保存下去的方法,同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程,悬浮型细胞直接分瓶就可以而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。
大鼠前脂肪细胞建立和培养简介:
创建的4因子转录法进行细胞制作,原料为末梢血单核细胞,采样简单。如使用新鲜单核细胞,2周后可获得细胞克隆体(图1),4周内便可以制作出初代细胞(图2)。在培养方面,使用无滋养层培养法对细胞进行增殖培养,可在每周获得2-3倍的细胞(图3,图4)。在细胞状态稳定后,进行免疫染色测试,对细胞的未分化状态进行确定,分别对细胞进行膜染色(图5)及核染色(图6),由此得到高质量的细胞。
大鼠前脂肪细胞主要服务:
1)细胞基础培养(有滋养层or无滋养层)
2)细胞增殖及冷冻保存
3)基础培养技术实习
4)新药及实验仪器上市前评估
大鼠前脂肪细胞培养的过程中,经常见到黑色的颗粒或小黑点,这种情况是怎么引起的呢?该怎么避免呢?
原 因:
黑点,大概有细胞本身带的,环境有的,还有人身上带进细胞间的,还有就是血清和培养基
1、如果小黑点有增殖趋势,那么就有可能是污染了,需要处理;
2、如果小黑点没有增殖趋势,且不影响细胞生长,也不影响实验的话,则可能
a、是“黑胶虫”,黑胶虫究竟是一种生物还是非生物,本身就存在争议。有人认为是从血清中来的一种原虫,也有人认为是细菌,或是真菌,也有人认为是血清中的蛋白的结晶。“黑胶虫”可寄生于动物细胞,也可以生存于培养基中,依靠细胞和培养基中的营养为生,并随大鼠前脂肪细胞传代而传代。“黑胶虫”与细胞竞争性生长,开始时对细胞并没有什么影响,但当黑胶虫的数量多到一定程度的时候, 细胞生长就会受到影响直至死亡,严重影响了科研活动的开展和进行。以前(这个至少是10年以前),很多实验室在养细胞时用国产血清,那时的血清可能质量不过关,有所谓的“黑胶虫”,但是也没有明确的鉴定。但是现在的血清,即使国产的,产品里这种现象就少见了。
b、是细胞碎片,或血清里德沉淀析出,在做布朗运动。
c、是核糖体,也可能是杂质
7652MEpiCGS乳腺上皮细胞生长因子 Mammary Epithelial Cell Growth Supplement5 ml
Cell Culture Reagents
OsrHSA rHSA重组人血清白蛋白Recombinant Human Serum Albumin1 g
0010FBS胎牛血清Fetal Bovine Serum, Human Cell Tested10 ml
0025FBS胎牛血清Fetal Bovine Serum, Human Cell Tested25 ml
0103T/E胰酶/EDTA消化液Trypsin/EDTA solution100 ml
0113TNS胰酶中和液Trypsin Neutralization Solution100 ml
0113-sfTNS-sf 胰酶中和液-无血清TNS-sf (Trypsin Neutralization Solution-serum free)100 ml
0123ECDS非酶细胞裂解液Enzyme-Free Cell Dissociation Solution100 ml
0133CFM细胞冻存液Cell Freezing Medium50 ml
0143SF-CFM无血清细胞冻存液 Serum-Free Cell Freezing Medium50 ml
0153StemCryo人胚胎干细胞冻存液Human Pluripotent Stem Cell Cryopreservation Medium50ml
0163StemCryo人胚胎干细胞冻存液Human Pluripotent Stem Cell Cryopreservation Medium,5 x 10mL
0173STI大豆胰蛋白酶抑制剂Soybean Trypsin Inhibitor50ml
0203TB台盼蓝Trypan Blue, 0.4%50 ml
0303DPBS磷酸盐缓冲液 Dulbecco’s Phosphate-Buffered Saline500 ml
0313HBSS平衡盐溶液 Hank's Balanced Salt Solution500 ml
0403PLL多聚赖氨酸 Poly-L-Lysine 1 mg/ml1 ml
更新时间:2024/3/23 17:27:02
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