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兔胸腺成纤维细胞传代培养
细胞在培养瓶长成致密单层后,已基本上饱和,为使细胞能继续生长,同时也将细胞数量扩大,就必须进行传代,再培养,传代培养也是一种将细胞保存下去的方法,同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程,悬浮型细胞直接分瓶就可以而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。
兔胸腺成纤维细胞建立和培养简介:
创建的4因子转录法进行细胞制作,原料为末梢血单核细胞,采样简单。如使用新鲜单核细胞,2周后可获得细胞克隆体(图1),4周内便可以制作出初代细胞(图2)。在培养方面,使用无滋养层培养法对细胞进行增殖培养,可在每周获得2-3倍的细胞(图3,图4)。在细胞状态稳定后,进行免疫染色测试,对细胞的未分化状态进行确定,分别对细胞进行膜染色(图5)及核染色(图6),由此得到高质量的细胞。
兔胸腺成纤维细胞主要服务:
1)细胞基础培养(有滋养层or无滋养层)
2)细胞增殖及冷冻保存
3)基础培养技术实习
4)新药及实验仪器上市前评估
兔胸腺成纤维细胞培养的过程中,经常见到黑色的颗粒或小黑点,这种情况是怎么引起的呢?该怎么避免呢?
原 因:
黑点,大概有细胞本身带的,环境有的,还有人身上带进细胞间的,还有就是血清和培养基
1、如果小黑点有增殖趋势,那么就有可能是污染了,需要处理;
2、如果小黑点没有增殖趋势,且不影响细胞生长,也不影响实验的话,则可能
a、是“黑胶虫”,黑胶虫究竟是一种生物还是非生物,本身就存在争议。有人认为是从血清中来的一种原虫,也有人认为是细菌,或是真菌,也有人认为是血清中的蛋白的结晶。“黑胶虫”可寄生于动物细胞,也可以生存于培养基中,依靠细胞和培养基中的营养为生,并随兔胸腺成纤维细胞传代而传代。“黑胶虫”与细胞竞争性生长,开始时对细胞并没有什么影响,但当黑胶虫的数量多到一定程度的时候, 细胞生长就会受到影响直至死亡,严重影响了科研活动的开展和进行。以前(这个至少是10年以前),很多实验室在养细胞时用国产血清,那时的血清可能质量不过关,有所谓的“黑胶虫”,但是也没有明确的鉴定。但是现在的血清,即使国产的,产品里这种现象就少见了。
b、是细胞碎片,或血清里德沉淀析出,在做布朗运动。
c、是核糖体,也可能是杂质
人非小细胞肺癌细胞NCI-H23168-1 & 15-1&35-11640 + 10%FBS
人肺癌细胞(淋巴结转移)NCI-H292926-1 & 31-51640+10%FBS
人肺癌细胞NCI-H32551214-1 & 22-1& 4-5 &20-21640+10%FBS+1%P/S 贴壁
人非小细胞肺癌细胞NCI-H3581215-4&34-4&34-5 1640+10%FBS+1%P/S 贴壁
人肺腺癌细胞NCI-H4411020-2 1640+10%FBS+1%P/S 贴壁
人小细胞肺癌细胞NCI-H446106-2&20-5&34-5&35-5 1640+10%FBS+1%P/S 半贴壁贴壁/悬浮,混合
人大细胞肺癌细胞NCI-H460 [H460]96-3&33-2&34-4 1640+10%FBS+1%P/S 贴壁
人结肠直肠腺癌细胞NCI-H5081114-2 & 15-2 & 15-4 1640+10%FBS+1%P/S 悬浮加贴壁
人肺鳞癌细胞NCI-H520814-4 1640+10%FBS+1%P/S 贴壁
人非小细胞肺癌细胞NCI-H52421-2 & 3-21640+10%FBS 悬浮
人非小细胞肺癌细胞NCI-H5261219-3 & 21-1&22-5 1640+10%FBS+1%P/S 悬浮
人神经内分泌前列腺癌细胞NCI-H660149-3 & 9-4& 10-11640添加0.005 mg/ml 胰岛素,0.01 mg/ml 转铁蛋白,30nM 亚硒酸钠,10 nM 氢化可的松,10 nM beta-雌二醇 ,2mM L-谷氨酰胺,5% 优质胎牛血清。 悬浮细胞
人大细胞肺癌细胞NCI-H661519-3 1640+10%FBS+1%P/S 贴壁
人结肠癌细胞NCI-H716724-1 1640+10%FBS+1%P/S 悬浮加贴壁
人骨髓瘤细胞NCI-H92987-1 &18-5 1640+10%FBS+1%P/S+50uM 悬浮
小鼠正常肝细胞NCTC146958-1DMEM +10%马血清+1%P/S
更新时间:2024/3/23 17:27:02
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