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产品分类
10 ΜL RNASE-FREE 白吸头(盒装长尖)
数量:大量
保质期:一年
保存条件:常温
规格:96支
我准备按照你提供的基本程序尝试一次。10 ΜL RNASE-FREE 白吸头(盒装长尖)还需要问的问题是:
1.洗涤包含体,实际上就是洗涤细胞裂解液离心后的沉淀,对吗?我将沉淀-20度保存,应该没有什么影响吧?另外,我看到有的包含体洗涤液配方中含有PMSF,是蛋白酶抑制剂,它是否对目的蛋白有影响呢?
2.尿素洗涤包含体,洗涤上清和沉淀分别进行SDS-PAGE,得到一个收率和纯度*佳的尿素浓度。10 ΜL RNASE-FREE 白吸头(盒装长尖)洗涤上清和沉淀是指用尿素洗涤细胞裂解沉淀的吗?但不溶的沉淀能跑SDS-PAGE吗?这个收率和纯度是指洗涤后溶液里面浸出的目的蛋白吗?
3.我表达的目的蛋白是分解底物释放无机磷酸盐的一种水解酶,不适合用含有磷酸盐的PBS溶液来洗涤和缓冲,而是用Tris-HCl来洗涤和缓冲的。那我用Tris-HCl来配8M尿素,对复性有影响吗?
不知道你能否提供相应的参考文献或者书目给我,我再仔细看看。
10 ΜL RNASE-FREE 白吸头(盒装长尖)技术回答:
1)包含体在-20度或-70度保存较好,包含体状态的蛋白稳定性好,一但复性成功,溶液状态的蛋白容易被降解。PMSF,是蛋白酶抑制剂,应该对目的蛋白影响不大。我原来做实验时一般不加PMSF,加与不加看你的蛋白的稳定性。
2)洗涤上清和沉淀是指用尿素洗涤细胞裂解产物离心后的沉淀,用tip挑一点沉淀后用1倍的loading buffer重悬,与其他样品一起煮后电泳。从洗涤上清和沉淀的电泳情况可以看出目的蛋白的损失情况和杂蛋白的去除情况,10 ΜL RNASE-FREE 白吸头(盒装长尖)选择一个合适的洗涤条件有时对纯化和得率很重要。
3)用Tris配尿素,OK!
M1252-02Mag-Bind Endo-free Plasmid Maxi Kit(20)
产品编号产品名称
磁珠无内毒素提取试剂盒:
M1253-01Mag-Bind Endo-free Plasmid Mega Kit(5)
M1253-02Mag-Bind Endo-free Plasmid Mega Kit(20)
磁珠质粒大量提取试剂盒:从200-250ml培养过夜菌液中提取1000-2000ug的质粒
M1257-01Mag-Bind Plasmid Maxi Kit(5)
M1257-02Mag-Bind Plasmid Maxi Kit(20)
磁珠质粒超大量提取试剂盒:从1-2L培养过夜的菌液中提取2-5mg的质粒
M1259-01Mag-Bind Plasmid Mega Kit(5)
M1259-02Mag-Bind Plasmid Mega Kit(20)
BAC/PAC大型质粒提取试剂盒:从1-5ml培养过夜的菌液中提取30ug BAC/PAC/P1等大片段质粒
D2156-01BAC/PAC DNA Kit (50)
D2156-02BAC/PAC DNA Kit (200)
D1055-01Fastfilter BAC/PAC DNA Kit (4x96)
D1055-02Fastfilter BAC/PAC DNA Kit (20x96)
D1056-01EZ-96 BAC/PAC DNA Kit (4x96)
D1056-02EZ-96 BAC/PAC DNA Kit (20x96)
D2157-01Endo-free BAC/PAC DNA Kit (50)
D2157-02Endo-free BAC/PAC DNA Kit (200)
M-13单链DNA纯化试剂盒:从1-5ml的噬菌体培养液中提取单链噬菌体DNA
D1900-01M13 DNA Kit(4x96)
D6900-01M13 DNA Kit (50)
更新时间:2024/3/23 17:27:02
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