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产品分类
显影粉
数量:大量
保质期:两年
保存条件:室温避光保存
规格:1袋
显影粉添加DMSO或者使用修饰化的碱基以及使用LA-Taq来扩增PCR这些在我也都做过,不过都正如你所说,都是直接扩增基因组或cDNA.
而高GC含量影响反转录也是肯定的,因为高GC肯定容易形成复杂的二级结构,这些可以参见《分子克隆》。“我至今没有听说高GC含量会不利于逆转录,有一个证据就是在FMDV基因组RNA中有长达500bp的GC tail,显影粉这个病毒的全基因组一样被测序出来”,但这并不能说明逆转录没有遇到麻烦,人家不会告诉你经过怎样的过程才测出来的。比如,对高GC含量的模板测序会比较困难吧,可是你到网上搜一搜,高GC含量的区域多的是,不然的话我也不无法预测我的基因5‘端有一个高GC区了是吗?我们不能因此就推出GC含量高不影响测序吧?我自己的例子也证明了高GC含量影响逆转录的,因为无论是筛库还是RACE,都是只能拿到此区域的相邻3’区,而可以肯定的是,所得到的一定不是全长,可见肯定是由于逆转录不过去。在搜一下文献,可以得出我的结论的。所以我现在的困难在于反转录,而不是PCR。
显影粉首先检查一下你的基因片断大小以及回收量(应该不是很大,所以回收的量很可能太少),太小的片断不容易连,如果是这样建议使用好的感受态,或增大回收的量。其次看一下你回收时所用的紫外,波长是否小于314nm,如果是建议使用314以上的,并且操作时间尽量减短。第三,建议将回收产物普通Taq加A,不需回收,再连一次。*后,检查一下感受态。还有,如果T-easy存放时间过长,建议使用新的。
难度不出很大。显影粉如果诱变的位点在基因中间,你可以用一个突变引物先引入突变;然后用这个突变体做一侧的引物(大引物),与另一个引物一起,以野生型基因为模板扩增。我们用这种方法做出来多个突变体。
ZR101-1TUREscript H Minus M-MuLV Reverse Transcriptase (反转录酶)5000UZOMANBIO
ZR101-210000UZOMANBIO
ZR101-310000U X 5ZOMANBIO
ZR102-1"TUREscript 1st Strand cDNA Synthesis Kit (链反转录试剂盒)
"25次ZOMANBIO
ZR102-250次ZOMANBIO
ZR103-1" TUREscript One Step RT-PCR Kit (一步法反转录试剂盒)
"25次ZOMANBIO
ZR103-250次ZOMANBIO
ZR104-1" TUREscript SYBR Green qRT-PCR Kit (两步法荧光定量反转录试剂盒)
"25次ZOMANBIO
ZR104-250次ZOMANBIO
目录号产品名称规格产地
优化组合类系列
ZM101-1DNA MarkerⅠ(条带100.200.300.400.500.600)50TZOMANBIO
ZM101-2DNA MarkerⅠ(条带100.200.300.400.500.600)500TZOMANBIO
ZM102-1DNA Marker Ⅱ(条带100.300.500.700.900.1200)50TZOMANBIO
ZM102-2DNA Marker Ⅱ(条带100.300.500.700.900.1200)500TZOMANBIO
更新时间:2024/3/23 17:27:15
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