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产品分类
一管式TMB显色液B (沉淀型)
数量:大量
保质期:一年
保存条件:2-8℃避光保存
规格:100mL
四甲基联苯胺,即TMB(3,3′,5,5′-Tetramethylbenzidine),是辣根过氧化物酶(Horseradish Peroxidase,HRP)的显色底物,在辣根过氧化物酶和H2O2存在时,TMB会产生可溶性蓝色产物(光吸收在370 nm),加入硫酸后,溶液呈黄色,此时可以在450 nm测定吸光度,因此TMB和H2O2一起常用于检测HRP的存在。跟HRP的其他底物(如ABTS和OPD)相比,TMB不但灵敏,而且无毒,所以在ELISA中的应用日趋广泛。传统的TMB显色试剂一般由两组份组成(另一个是H2O2),必须在使用前新鲜配制,并且容易产生沉淀,使用相对不太方便,并且也容易导致操作误差。为克服这些缺点,本公司开发了只有一个溶液的TMB显色液,它具有下列特点:1. 即开即用,操作简单,用户不需要配制任何溶液。2. 显色液只是单一溶液,简化了操作步骤,降低了操作误差,结果更加稳定。3. 既可用于ELISA等的显色液,也可以用于检测血液或血红蛋白等样品中的过氧化物酶含量。4. 该底物溶液含TMB、H2O2和特殊的稳定剂,可以在4℃长期放置。5. 分沉淀可溶型(A型,适用于ELISA)和沉淀不可溶型(B型,适用于Western免疫检测)两种。
酵母与原核之间在重组蛋白的生产成本上的比较要看具体情况。一管式TMB显色液B (沉淀型)传统的酿酒酵母与大肠杆菌相比产量多数情况下处于劣势。但毕赤酵母高密发酵特性突出,表达量则常常超过大肠杆菌系统,如果实现高效分泌表达,则纯化成本非常低,具有生产成本优势。但毕赤酵母的胞内表达在纯化方面则不一定有优势。
一管式TMB显色液B (沉淀型)除了用于规模化生产重组蛋白之外,毕赤酵母还在基础研究方面发挥着重要 作用,比如表达蛋白用于结构分析,信号传导途径研究,当然也包括酶学研究。用酵母或原核系统对于活性未知的酶进行研究的例子少,一般酶活鉴定往往是用天然的蛋白解决的。
如果需要,完全可以利用毕赤酵母进行酶活性的探索,从以往的战绩来看,毕赤酵母表达表达成功的例子实在是太多了,一管式TMB显色液B (沉淀型)比例也很高,虽然仍存在风险。
1)原核诱导时间,从你的结果来看,诱导1-5小时变化不大,时间点影响较小,取3小时没有问题。很多情况下,温度对可溶性影响较大,不知道你30度诱导的可溶性如何?如果蛋白主要是可溶性的,那进一步降低诱导温度的意义也就小了。如果仍有较多的包含体,一管式TMB显色液B (沉淀型)倒是可以再降低一下诱导温度。此外,很多蛋白包含体复性后有活性,如果可溶性表达困难或表达量太低,仍可以考虑包含体复性策略。
2)酵母细胞的破壁可以采用机械法,也可以采用酶法。机械法主要是高压匀质和珠磨,主要用于中试和生产,但有的仪器也可以兼顾实验室规模,这两种方法效率较高。酶法主要用于制备球形体,是一种外源基因高效转化的方法,一管式TMB显色液B (沉淀型)但用于破壁检测表达则成本太高,此外使用酶破壁也会引入杂蛋白。我查过一篇文献,是小量裂截用于表达检测的,我没有直接作过,但我们实验室的研究生反映还可以。
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更新时间:2024/3/23 17:27:15
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