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产品分类
TTH DNA聚合酶
数量: 大量
保质期: 一年
保存条件: -20℃保存
规格: 250U
本酶来源于嗜热菌Thermus thermophilus HB8。在有Mg2+等二价阳离子存在的情况下,具有DNA多聚酶活性。它与Taq酶一样被广泛用于PCR反应,但耐热性比Taq酶高,因此对高GC含量模板的PCR也有较好的效果。本酶基本上没有3'→5'外切酶活性及5'→3'外切酶活性,所以也可用于双脱氧法测序。另外,本酶具有RTase 活性,在Mn2+存在的情况下,RTase活性会得到强化。利用该特性,可以用来在同一管中进行逆转录反应和PCR反应,即一步法RT PCR。(但是,在Mn2+存在时,RT-PCR的准确性不高)此外,本酶与Taq DNA多聚酶一样,PCR产物可通过T载体进行TA克隆。它具有下列特点:1. RT-PCR反应的特异性增加:在较高的温度下进行逆转录,增加了引物杂交和延伸的特异性。2. 二级结构减少:在较高的温度下进行逆转录,减少了由于RNA二级结构引起的问题。
1.感受态的制备
(1)TTH DNA聚合酶接种单菌落于2ml LB培养液中,37℃过夜。
(2)取0.25ml过夜菌入25ml LB培养液中,37℃振摇4~6h至A590=0.4~0.6。
(3)倒入50ml管内,水浴10min,以2500~3000rpm离心5min,弃上清。
(4)缓慢加入75mmol/L预冷CaCl25ml悬浮菌体,冰浴20min,同上离心弃上清。
(5)缓慢加入75mmol/L预冷CaCl21.0ml轻轻混匀后分装在1.5ml Eppendorf管中,每管200μl,冰浴1~2h。
2.重组DNA的转化
(1)将3只Eppendorf管按下列转化项目作好标记:
(2)冰浴30min至1h。中间摇动3次,以防受体菌沉底。
(3)42℃90s。
(4)37℃水浴5min。
(5)TTH DNA聚合酶加入无相应抗生素的Lb 200μl,混匀后,37℃水浴30~60min。
(6)分别取3组反应物各50μl在含相应抗生素的固体LB培养基平皿上涂布,室温下干燥,然后倒置于37℃温箱中培养过夜。
基因工程:有目的的通过分子克隆技术,人为的操作改造基因,改变生物遗传性状的系列过程。
TTH DNA聚合酶载体:能在连接酶的作用下和外源DNA 片段连接并运送DNA 分子进入受体细胞的DNA 分子。
转化:指质粒DNA 或以它为载体构建的重组DNA 导入细菌的过程。
感染:以噬菌体、粘性质粒和真核细胞病毒为载体的重组DNA 分子,在体外经过包装成具有感染能力的病毒或噬菌体颗粒,才能感染适当的细胞,并在细胞内扩增。
转导:指以噬菌体为载体,TTH DNA聚合酶在细菌之间转移DNA 的过程,有时也指在真核细胞之间通过逆转录病毒转移和获得细胞DNA 的过程。
转染:指病毒或以它为载体构建的重组子导入真核细胞的过程。
R6616-01Blood RNA Maxi Kit(5)
R6616-02Blood RNA Maxi Kit(20)
血液RNA小量提取试剂盒:从小于1ml新鲜血液中纯化3-10ug总RNA
R6814-00Blood RNA Kit(5)
R6814-01Blood RNA Kit(50)
R6814-02Blood RNA Kit(200)
软体动物RNA提取试剂盒:从软体动物、节肢动物、扁形虫等低等脊椎动物组织中提取RNA
R6875-00Molluse RNA Kit(5)
R6875-01Molluse RNA Kit(50)
R6875-02Molluse RNA Kit(200)
酵母RNA小量提取试剂盒:从6X107个酵母细胞中纯化RNA
R6870-00Yeast RNA Kit(5)
R6870-01Yeast RNA Kit(50)
更新时间:2024/3/23 17:27:28
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