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人NK细胞传代培养
细胞在培养瓶长成致密单层后,已基本上饱和,为使细胞能继续生长,同时也将细胞数量扩大,就必须进行传代,再培养,传代培养也是一种将细胞保存下去的方法,同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程,悬浮型细胞直接分瓶就可以而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。
人NK细胞建立和培养简介:
创建的4因子转录法进行细胞制作,原料为末梢血单核细胞,采样简单。如使用新鲜单核细胞,2周后可获得细胞克隆体(图1),4周内便可以制作出初代细胞(图2)。在培养方面,使用无滋养层培养法对细胞进行增殖培养,可在每周获得2-3倍的细胞(图3,图4)。在细胞状态稳定后,进行免疫染色测试,对细胞的未分化状态进行确定,分别对细胞进行膜染色(图5)及核染色(图6),由此得到高质量的细胞。
人NK细胞主要服务:
1)细胞基础培养(有滋养层or无滋养层)
2)细胞增殖及冷冻保存
3)基础培养技术实习
4)新药及实验仪器上市前评估
人NK细胞培养的过程中,经常见到黑色的颗粒或小黑点,这种情况是怎么引起的呢?该怎么避免呢?
原 因:
黑点,大概有细胞本身带的,环境有的,还有人身上带进细胞间的,还有就是血清和培养基
1、如果小黑点有增殖趋势,那么就有可能是污染了,需要处理;
2、如果小黑点没有增殖趋势,且不影响细胞生长,也不影响实验的话,则可能
a、是“黑胶虫”,黑胶虫究竟是一种生物还是非生物,本身就存在争议。有人认为是从血清中来的一种原虫,也有人认为是细菌,或是真菌,也有人认为是血清中的蛋白的结晶。“黑胶虫”可寄生于动物细胞,也可以生存于培养基中,依靠细胞和培养基中的营养为生,并随人NK细胞传代而传代。“黑胶虫”与细胞竞争性生长,开始时对细胞并没有什么影响,但当黑胶虫的数量多到一定程度的时候, 细胞生长就会受到影响直至死亡,严重影响了科研活动的开展和进行。以前(这个至少是10年以前),很多实验室在养细胞时用国产血清,那时的血清可能质量不过关,有所谓的“黑胶虫”,但是也没有明确的鉴定。但是现在的血清,即使国产的,产品里这种现象就少见了。
b、是细胞碎片,或血清里德沉淀析出,在做布朗运动。
c、是核糖体,也可能是杂质
CEM/C1RPMI-1640(GIBCO)+10%胎牛血清人急性淋巴细胞白血病细胞
T84D-MEM/F-12培养基+5%胎牛血清人结肠腺癌肺转移细胞
NCI-H716 [H716]RPMI-1640(GIBCO)+10%胎牛血清人结直肠腺癌细胞
RWPE-1K-SFM+0.05mg/ml BPE+5ng/ml EGF人正常前列腺上皮细胞
WPMY-1DMEM培养基+5%胎牛血清人正常前列腺基质永生化细胞
22RV1RPMI-1640(GIBCO)+10%胎牛血清人前列腺癌细胞
DU 145F-12培养基+10%胎牛血清人前列腺癌细胞
LNCaP clone FGCRPMI-1640(GIBCO)+10%胎牛血清人前列腺癌细胞
PC-3F-12培养基+10%胎牛血清人前列腺癌细胞
HeLaDMEM+10% FBS人宫颈癌细胞
MDA-MB-415L-15培养基+15%胎牛血清人乳腺腺癌细胞
MDA-MB-436L-15培养基+10%胎牛血清人乳腺腺癌细胞
HeLa 229RPMI-1640(GIBCO)+10%胎牛血清人宫颈癌细胞
SiHaMEM培养基(GIBCO)+10%胎牛血清人子宫颈鳞癌细胞
C-33 AMEM培养基(GIBCO)+10%胎牛血清人子宫颈癌
MS751MEM培养基(GIBCO)+10%胎牛血清人子宫颈表皮癌细胞
ME-180McCOY's 5A+10%胎牛血清人子宫颈表皮癌细胞
RL95-2D-MEM/F-12培养基+10%胎牛血清人子宫内膜癌细胞
Ca SkiRPMI-1640(GIBCO)+10%胎牛血清人宫颈癌肠转移细胞
HCC 94 [HCC941122]RPMI-1640(GIBCO)+10%胎牛血清人子宫鳞癌细胞(高分化)
HEC-1-BMEM培养基(GIBCO)+10%胎牛血清人子宫内膜腺癌细胞
SK-OV-3McCoy'5A+10%胎牛血清人卵巢癌细胞
ES-2McCOY's 5A+10%胎牛血清人卵巢透明细胞癌
HCC1937RPMI-1640(GIBCO)+10%胎牛血清人乳腺癌细胞
JARDMEM培养基+10%胎牛血清人胎盘绒毛癌细胞
WISHMEM培养基(GIBCO)+10%胎牛血清人羊膜细胞
更新时间:2024/3/23 17:26:47
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