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人牙周膜干细胞传代培养
细胞在培养瓶长成致密单层后,已基本上饱和,为使细胞能继续生长,同时也将细胞数量扩大,就必须进行传代,再培养,传代培养也是一种将细胞保存下去的方法,同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程,悬浮型细胞直接分瓶就可以而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。
人牙周膜干细胞建立和培养简介:
创建的4因子转录法进行细胞制作,原料为末梢血单核细胞,采样简单。如使用新鲜单核细胞,2周后可获得细胞克隆体(图1),4周内便可以制作出初代细胞(图2)。在培养方面,使用无滋养层培养法对细胞进行增殖培养,可在每周获得2-3倍的细胞(图3,图4)。在细胞状态稳定后,进行免疫染色测试,对细胞的未分化状态进行确定,分别对细胞进行膜染色(图5)及核染色(图6),由此得到高质量的细胞。
人牙周膜干细胞主要服务:
1)细胞基础培养(有滋养层or无滋养层)
2)细胞增殖及冷冻保存
3)基础培养技术实习
4)新药及实验仪器上市前评估
人牙周膜干细胞培养的过程中,经常见到黑色的颗粒或小黑点,这种情况是怎么引起的呢?该怎么避免呢?
原 因:
黑点,大概有细胞本身带的,环境有的,还有人身上带进细胞间的,还有就是血清和培养基
1、如果小黑点有增殖趋势,那么就有可能是污染了,需要处理;
2、如果小黑点没有增殖趋势,且不影响细胞生长,也不影响实验的话,则可能
a、是“黑胶虫”,黑胶虫究竟是一种生物还是非生物,本身就存在争议。有人认为是从血清中来的一种原虫,也有人认为是细菌,或是真菌,也有人认为是血清中的蛋白的结晶。“黑胶虫”可寄生于动物细胞,也可以生存于培养基中,依靠细胞和培养基中的营养为生,并随人牙周膜干细胞传代而传代。“黑胶虫”与细胞竞争性生长,开始时对细胞并没有什么影响,但当黑胶虫的数量多到一定程度的时候, 细胞生长就会受到影响直至死亡,严重影响了科研活动的开展和进行。以前(这个至少是10年以前),很多实验室在养细胞时用国产血清,那时的血清可能质量不过关,有所谓的“黑胶虫”,但是也没有明确的鉴定。但是现在的血清,即使国产的,产品里这种现象就少见了。
b、是细胞碎片,或血清里德沉淀析出,在做布朗运动。
c、是核糖体,也可能是杂质
B16-F0-EGFP (稳定株)DMEM+10% FBS+200ug/ml G418小鼠黑色素瘤细胞
T24-EGFP(CMV-EGFP慢病毒构建稳定株)1640+10% FBS人膀胱癌细胞
Hela-Luc (稳定株)DMEM+10% FBS+200ug/ml Zeocin人宫颈癌细胞
THP1-Blue (稳定株)1640+10% FBS(热灭活)+200ug/ml Zeocin+0.05mM β-ME人单核细胞
THP1-Blue-CD14(稳定株)1640+10% FBS(热灭活)+200ug/ml Zeocin+10ug/ml Blasticidin S+0.05mM β-ME人单核细胞
C6-RFP(慢病毒构建稳定株)DMEM+10% FBS大鼠脑胶质瘤细胞
SW480-EGFP-puro [SW480-pSB4](慢病毒构建稳定株)1640+10% FBS+2μg/ml puromycin人结肠腺癌细胞
OPM-2-UBC-EGFP(稳定株)1640+20% FBS(热灭活)人骨髓瘤细胞
NCI-H929-UBC-EGFP(稳定株)1640+20% FBS(热灭活)人骨髓瘤细胞
OPM-2-CMV-EGFP(稳定株)1640+20% FBS(热灭活)人骨髓瘤细胞
NCI-H929-CMV-EGFP(稳定株)1640+20% FBS(热灭活)人骨髓瘤细胞
ATDC-5-EGFP[ATDC-5-pGC-FU-GFP](稳定株)DMEM/F12(1:1)+10%胎牛血清小鼠软骨细胞
U-373MG-EGFP-puro[U-373MG-pLVT7](慢病毒构建稳定株)1640+10%胎牛血清+2μg/ml puromycin人脑神经胶质瘤细胞
Tca-8113-EGFP(CMV-EGFP慢病毒构建稳定株)1640+10% FBS人舌鳞癌细胞
CAL 27-EGFP(CMV-EGFP慢病毒构建稳定株)DMEM+10% FBS人舌鳞癌细胞
U-373MG-EGFP(Ubc-EGFP慢病毒构建稳定株)DMEM+10% FBS人脑神经胶质瘤细胞
U-87MG-EGFP(Ubc-EGFP慢病毒构建稳定株)DMEM+10% FBS人脑星形胶质母细胞瘤
Eca-109-GFP-puro(pLVT7慢病毒构建稳定株)1640+10% FBS+2μg/ml puromycin人食管癌细胞
CAL 27-EGFP-puro(pLVT7慢病毒构建稳定株)DMEM+10% FBS+2μg/ml puromycin人舌鳞癌细胞
SW620-EGFP-puro(慢病毒构建稳定株)LL-15+10%胎牛血清+2μg/ml puromycin人结肠癌细胞
BxPc-3-EGFP-puro (慢病毒构建稳定株)1640+10% FBS+2μg/ml puromycin人原位胰腺腺癌细胞
更新时间:2024/3/23 17:26:47
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