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产品分类
BST DNA聚合酶,大片段
数量: 大量
保质期: 一年
保存条件: -20℃保存
规格: 800U
Bst DNA聚合酶大片段是将缺失5'→3'外切核酸酶结构域的Bacillus stearothermophilus(嗜热脂肪芽孢杆菌)DNA聚合酶基因在E.coli中表达纯化而得,它具有5'→3'DNA聚合酶活性,但不 具有5'→3'外切核酸酶活性。它具有下列特点:1. 嗜温性和强链置能力,可以用于LAMP扩增。2. 可以在68℃测序,适合纳克含量DNA模板的快速测序和富含GC区域的DNA测序。建议反应温度不要超过 70 ℃。3. 不具有 3' →5' 外切酶活性,没有纠错功能。4. 80℃ 10分钟即可热失活。
酵母与原核之间在重组蛋白的生产成本上的比较要看具体情况。BST DNA聚合酶,大片段传统的酿酒酵母与大肠杆菌相比产量多数情况下处于劣势。但毕赤酵母高密发酵特性突出,表达量则常常超过大肠杆菌系统,如果实现高效分泌表达,则纯化成本非常低,具有生产成本优势。但毕赤酵母的胞内表达在纯化方面则不一定有优势。
BST DNA聚合酶,大片段除了用于规模化生产重组蛋白之外,毕赤酵母还在基础研究方面发挥着重要 作用,比如表达蛋白用于结构分析,信号传导途径研究,当然也包括酶学研究。用酵母或原核系统对于活性未知的酶进行研究的例子少,一般酶活鉴定往往是用天然的蛋白解决的。
如果需要,完全可以利用毕赤酵母进行酶活性的探索,从以往的战绩来看,毕赤酵母表达表达成功的例子实在是太多了,BST DNA聚合酶,大片段比例也很高,虽然仍存在风险。
1)原核诱导时间,从你的结果来看,诱导1-5小时变化不大,时间点影响较小,取3小时没有问题。很多情况下,温度对可溶性影响较大,不知道你30度诱导的可溶性如何?如果蛋白主要是可溶性的,那进一步降低诱导温度的意义也就小了。如果仍有较多的包含体,BST DNA聚合酶,大片段倒是可以再降低一下诱导温度。此外,很多蛋白包含体复性后有活性,如果可溶性表达困难或表达量太低,仍可以考虑包含体复性策略。
2)酵母细胞的破壁可以采用机械法,也可以采用酶法。机械法主要是高压匀质和珠磨,主要用于中试和生产,但有的仪器也可以兼顾实验室规模,这两种方法效率较高。酶法主要用于制备球形体,是一种外源基因高效转化的方法,BST DNA聚合酶,大片段但用于破壁检测表达则成本太高,此外使用酶破壁也会引入杂蛋白。我查过一篇文献,是小量裂截用于表达检测的,我没有直接作过,但我们实验室的研究生反映还可以。
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更新时间:2024/3/23 17:27:28
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