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产品分类
耐热型MMLV逆转录酶(H-)
数量: 大量
保质期: 一年
保存条件: -20℃保存
规格: 1000U
本产品为点突变型M-MLV逆转录酶(RNase H 缺失),是RNA 依赖的DNA 聚合酶,可用于长mRNA (>5kb) 为模板的cDNA 合成。RNase H 活性的缺失有利于其应用,因为在长孵育时间的时候,RNase H 会开始降解模板。缺失了RNase H 活性的逆转录酶为长cDNA 的制备及包含高比例全长cDNA 的文库制备提供了更好的选择。它具有下列特点:1. 温度稳定性,点突变产物的热稳定性可防止与二级结构相关的问题,增强了与模拟的亲和力。2. 聚合酶活性增强,本产品与缺失突变得到的M-MLV RT(Cat.# 130912) 相比,具有更高的cDNA 产率。3. 广泛的工作范围:提高了逆转录的性能,使得可以在更广泛的酶浓度和底物浓度的条件下工作。低温运输和-20℃保存、有效期一年。
1.感受态的制备
(1)耐热型MMLV逆转录酶(H-)接种单菌落于2ml LB培养液中,37℃过夜。
(2)取0.25ml过夜菌入25ml LB培养液中,37℃振摇4~6h至A590=0.4~0.6。
(3)倒入50ml管内,水浴10min,以2500~3000rpm离心5min,弃上清。
(4)缓慢加入75mmol/L预冷CaCl25ml悬浮菌体,冰浴20min,同上离心弃上清。
(5)缓慢加入75mmol/L预冷CaCl21.0ml轻轻混匀后分装在1.5ml Eppendorf管中,每管200μl,冰浴1~2h。
2.重组DNA的转化
(1)将3只Eppendorf管按下列转化项目作好标记:
(2)冰浴30min至1h。中间摇动3次,以防受体菌沉底。
(3)42℃90s。
(4)37℃水浴5min。
(5)耐热型MMLV逆转录酶(H-)加入无相应抗生素的Lb 200μl,混匀后,37℃水浴30~60min。
(6)分别取3组反应物各50μl在含相应抗生素的固体LB培养基平皿上涂布,室温下干燥,然后倒置于37℃温箱中培养过夜。
基因工程:有目的的通过分子克隆技术,人为的操作改造基因,改变生物遗传性状的系列过程。
耐热型MMLV逆转录酶(H-)载体:能在连接酶的作用下和外源DNA 片段连接并运送DNA 分子进入受体细胞的DNA 分子。
转化:指质粒DNA 或以它为载体构建的重组DNA 导入细菌的过程。
感染:以噬菌体、粘性质粒和真核细胞病毒为载体的重组DNA 分子,在体外经过包装成具有感染能力的病毒或噬菌体颗粒,才能感染适当的细胞,并在细胞内扩增。
转导:指以噬菌体为载体,耐热型MMLV逆转录酶(H-)在细菌之间转移DNA 的过程,有时也指在真核细胞之间通过逆转录病毒转移和获得细胞DNA 的过程。
转染:指病毒或以它为载体构建的重组子导入真核细胞的过程。
R0424-02RNAsafer Stabilizer Reagent(250ml)
R5465-01RNAsafer II Stabilizer Reagent(50ml)
R5465-02RNAsafer II Stabilizer Reagent(100ml)
SQ 总RNA提取试剂盒
R3053-001x108 Cells, 0.5g Tissue
R3053-051x109 Cells, 5g Tissue
R3053-406.7 x109 Cells, 40g Tissue
一步法RNA提取试剂盒:用传统三相分离法从动物组织/培养细胞中纯化总RNA
R6830-01RNA-Solv Reagent (100ml)
R6830-02RNA-Solv Reagent (200ml)
总RNA提取试剂盒:从1X107个真核细胞,100mg动物/植物组织中提取100ug总RNA
R6934-01Total RNA Kit II(50)
R6934-02Total RNA Kit II(200)
更新时间:2024/3/23 17:27:28
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