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产品分类
核酸内切酶 V
数量: 大量
保质期: 一年
保存条件: -20℃保存
规格: 250U
核酸内切酶V 是在 E. coli 中发现的一种 DNA 修复酶。它识别 DNA 中的脱氧次黄嘌呤核苷,即脱氧腺苷的去氨基产物。核酸内切酶 V,也称为脱氧次黄嘌呤核苷 3' 内切酶,识别含脱氧次黄嘌呤核苷 (无论配对与否) 的双链或单链DNA 。也可识别含脱碱基 (AP) 位点或尿素、碱基错配、插入/缺失错配、发夹结构、未配对 loop 环、折叠 flaps 和类 -Y 型结构的 DNA ,但是识别后者的能力不如前者。普遍认为核酸内切酶 V 发挥 DNA 修复功能时,还需另外一种蛋白的存在,因为它不能切除 DNA 上的脱氧次黄苷或受损碱基。 核酸内切酶 V 对错配脱氧次黄嘌呤核苷 3' 端第二个或第三个磷酸二酯键进行切割,切割第二个磷酸二酯键的效率是 95%,第三个磷酸二酯键的效率是 5%,产生一个 3' 羟基、5' 磷酸的切刻。本产品具体有下列特点:1. 切割错配2. 切割含脱氧次黄嘌呤核苷的寡核苷酸,对含错配碱基的寡核苷酸亲和力较弱
1.感受态的制备
(1)核酸内切酶 V接种单菌落于2ml LB培养液中,37℃过夜。
(2)取0.25ml过夜菌入25ml LB培养液中,37℃振摇4~6h至A590=0.4~0.6。
(3)倒入50ml管内,水浴10min,以2500~3000rpm离心5min,弃上清。
(4)缓慢加入75mmol/L预冷CaCl25ml悬浮菌体,冰浴20min,同上离心弃上清。
(5)缓慢加入75mmol/L预冷CaCl21.0ml轻轻混匀后分装在1.5ml Eppendorf管中,每管200μl,冰浴1~2h。
2.重组DNA的转化
(1)将3只Eppendorf管按下列转化项目作好标记:
(2)冰浴30min至1h。中间摇动3次,以防受体菌沉底。
(3)42℃90s。
(4)37℃水浴5min。
(5)核酸内切酶 V加入无相应抗生素的Lb 200μl,混匀后,37℃水浴30~60min。
(6)分别取3组反应物各50μl在含相应抗生素的固体LB培养基平皿上涂布,室温下干燥,然后倒置于37℃温箱中培养过夜。
基因工程:有目的的通过分子克隆技术,人为的操作改造基因,改变生物遗传性状的系列过程。
核酸内切酶 V载体:能在连接酶的作用下和外源DNA 片段连接并运送DNA 分子进入受体细胞的DNA 分子。
转化:指质粒DNA 或以它为载体构建的重组DNA 导入细菌的过程。
感染:以噬菌体、粘性质粒和真核细胞病毒为载体的重组DNA 分子,在体外经过包装成具有感染能力的病毒或噬菌体颗粒,才能感染适当的细胞,并在细胞内扩增。
转导:指以噬菌体为载体,核酸内切酶 V在细菌之间转移DNA 的过程,有时也指在真核细胞之间通过逆转录病毒转移和获得细胞DNA 的过程。
转染:指病毒或以它为载体构建的重组子导入真核细胞的过程。
ZI319-1羊抗小鼠IgG-RBITC0.5mlZOMANBIO
ZI319-2羊抗小鼠IgG-RBITC1mlZOMANBIO
ZI319-3羊抗小鼠IgG-RBITC5mlZOMANBIO
ZI320-1羊抗大鼠IgG-FITC0.5mlZOMANBIO
ZI320-2羊抗大鼠IgG-FITC1mlZOMANBIO
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ZI321-1羊抗大鼠IgG-RBITC0.5mlZOMANBIO
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ZI323-1羊抗猪IgG-RBITC0.5mlZOMANBIO
更新时间:2024/3/23 17:27:28
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