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产品分类
T4 RNA 连接酶 2 (截短型 K227Q)
数量: 大量
保质期: 一年
保存条件: -20℃保存
规格: 2000U
T4 RNA 连接酶 2(截短型 K227Q),又称T4 Rnl2tr K227Q, 可特异地将 5' 末端预腺苷化的DNA或RNA连接到RNA 3' OH 末端。该酶连接时不需要ATP,但需要预腺苷化的接头。T4 Rnl2tr K227Q 是 T4RNA 连接酶 2 截短型 的点突变体,K227 的突变减少了酶、赖氨酰及腺苷复合物的形成,也降低了非特异性的连接产物 (多连体和环状体) ,后者可能是通过降低该酶从接头向RNA5'磷酸基转运腺苷基团的微量活性而实现的。 该酶在连接反应中,无需 ATP,利用预腺苷化的接头和降低的酶-赖氨酰腺苷化活性能将连接背景降为。此酶已被用于 microRNA 克隆中接头的优化连接。1. 将预腺苷化的 DNA 或 RNA 序列标签连接到任何 RNA 3' 末端2. 将单链腺苷化引物连接至小 RNA 上,用于 cDNA 克隆文库构建3. 将单链腺苷化引物连接至 RNA 上,用于链特异 cDNA 文库构建4. 无单链和双链 DNA 核酸外切酶、核酸内切酶、RNase 以及磷酸酶的污染。
1.感受态的制备
(1)T4 RNA 连接酶 2 (截短型 K227Q)接种单菌落于2ml LB培养液中,37℃过夜。
(2)取0.25ml过夜菌入25ml LB培养液中,37℃振摇4~6h至A590=0.4~0.6。
(3)倒入50ml管内,水浴10min,以2500~3000rpm离心5min,弃上清。
(4)缓慢加入75mmol/L预冷CaCl25ml悬浮菌体,冰浴20min,同上离心弃上清。
(5)缓慢加入75mmol/L预冷CaCl21.0ml轻轻混匀后分装在1.5ml Eppendorf管中,每管200μl,冰浴1~2h。
2.重组DNA的转化
(1)将3只Eppendorf管按下列转化项目作好标记:
(2)冰浴30min至1h。中间摇动3次,以防受体菌沉底。
(3)42℃90s。
(4)37℃水浴5min。
(5)T4 RNA 连接酶 2 (截短型 K227Q)加入无相应抗生素的Lb 200μl,混匀后,37℃水浴30~60min。
(6)分别取3组反应物各50μl在含相应抗生素的固体LB培养基平皿上涂布,室温下干燥,然后倒置于37℃温箱中培养过夜。
基因工程:有目的的通过分子克隆技术,人为的操作改造基因,改变生物遗传性状的系列过程。
T4 RNA 连接酶 2 (截短型 K227Q)载体:能在连接酶的作用下和外源DNA 片段连接并运送DNA 分子进入受体细胞的DNA 分子。
转化:指质粒DNA 或以它为载体构建的重组DNA 导入细菌的过程。
感染:以噬菌体、粘性质粒和真核细胞病毒为载体的重组DNA 分子,在体外经过包装成具有感染能力的病毒或噬菌体颗粒,才能感染适当的细胞,并在细胞内扩增。
转导:指以噬菌体为载体,T4 RNA 连接酶 2 (截短型 K227Q)在细菌之间转移DNA 的过程,有时也指在真核细胞之间通过逆转录病毒转移和获得细胞DNA 的过程。
转染:指病毒或以它为载体构建的重组子导入真核细胞的过程。
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更新时间:2024/3/23 17:27:28
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