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价格： 型号：
原产地：中国大陆发布时间：2016/9/26 13:40:47
采购度：254
T4 DNA连接酶（T4 DNA LIGASE)
数量： 大量
保质期： 一年
保存条件： -21℃保存
规格： 1000U
T4 DNA连接酶从表达T4 gene 30的E.coli细胞中分离纯化而得，由一个分子量为68 KDa的单亚基组成。1. 催化连接反应，即dsDNA，dsRNA和DNA/RNA分子的粘性末端和平末端5＇-P末端和3＇ -OH末端之间形成磷酸二酯键。2. 修复dsDNA反应中的切口（Nick）3. 催化pyrophosphate 和ATP之间的磷酸交换反应（Weiss酶单位定义原理）4. 需要ATP、Mg2+ 和DTT，*佳pH为pH 7.5 - 8.0。5. NaCl 浓度在200 mM以上时有抑制作用。6. 1 %-10% PEG和 150-200 mM NaCl能促进连接反应（尤其是平末端DNA）效率。
1．感受态的制备
（1）T4 DNA连接酶（T4 DNA LIGASE)接种单菌落于2ml LB培养液中，37℃过夜。
（2）取0.25ml过夜菌入25ml LB培养液中，37℃振摇4～6h至A590=0.4～0.6。
（3）倒入50ml管内，水浴10min，以2500～3000rpm离心5min，弃上清。
（4）缓慢加入75mmol/L预冷CaCl25ml悬浮菌体，冰浴20min，同上离心弃上清。
（5）缓慢加入75mmol/L预冷CaCl21.0ml轻轻混匀后分装在1.5ml Eppendorf管中，每管200μl，冰浴1～2h。
2．重组DNA的转化
（1）将3只Eppendorf管按下列转化项目作好标记：
（2）冰浴30min至1h。中间摇动3次，以防受体菌沉底。
（3）42℃90s。
（4）37℃水浴5min。
（5）T4 DNA连接酶（T4 DNA LIGASE)加入无相应抗生素的Lb 200μl，混匀后，37℃水浴30～60min。
（6）分别取3组反应物各50μl在含相应抗生素的固体LB培养基平皿上涂布，室温下干燥，然后倒置于37℃温箱中培养过夜。
基因工程:有目的的通过分子克隆技术，人为的操作改造基因，改变生物遗传性状的系列过程。
T4 DNA连接酶（T4 DNA LIGASE)载体:能在连接酶的作用下和外源DNA 片段连接并运送DNA 分子进入受体细胞的DNA 分子。
转化:指质粒DNA 或以它为载体构建的重组DNA 导入细菌的过程。
感染:以噬菌体、粘性质粒和真核细胞病毒为载体的重组DNA 分子，在体外经过包装成具有感染能力的病毒或噬菌体颗粒，才能感染适当的细胞，并在细胞内扩增。
转导:指以噬菌体为载体，T4 DNA连接酶（T4 DNA LIGASE)在细菌之间转移DNA 的过程，有时也指在真核细胞之间通过逆转录病毒转移和获得细胞DNA 的过程。
转染:指病毒或以它为载体构建的重组子导入真核细胞的过程。
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更新时间：2024/3/23 17:27:28
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