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产品分类
大肠杆菌DNA连接酶(E.COLI LIGASE)
数量: 大量
保质期: 一年
保存条件: -20℃保存
规格: 1000U
本酶催化相邻DNA链的5′-P末端和3′-OH末端以磷酸二酯键结合的反应,需NAD作辅酶。本酶只能催化突出末端DNA之间的连接,但如果在PEG及高浓度一价阳离子存在的条件下,也能连接平滑末端的DNA,但不能催化DNA的5′-P末端与RNA的3′-OH末端以及RNA之间的连接。此产品主要用途是: DN段和载体DNA的连接。 DN段和Linker或Adaptor DNA的连接。 cDNA的第二条链的合成。
1.感受态的制备
(1)大肠杆菌DNA连接酶(E.COLI LIGASE)接种单菌落于2ml LB培养液中,37℃过夜。
(2)取0.25ml过夜菌入25ml LB培养液中,37℃振摇4~6h至A590=0.4~0.6。
(3)倒入50ml管内,水浴10min,以2500~3000rpm离心5min,弃上清。
(4)缓慢加入75mmol/L预冷CaCl25ml悬浮菌体,冰浴20min,同上离心弃上清。
(5)缓慢加入75mmol/L预冷CaCl21.0ml轻轻混匀后分装在1.5ml Eppendorf管中,每管200μl,冰浴1~2h。
2.重组DNA的转化
(1)将3只Eppendorf管按下列转化项目作好标记:
(2)冰浴30min至1h。中间摇动3次,以防受体菌沉底。
(3)42℃90s。
(4)37℃水浴5min。
(5)大肠杆菌DNA连接酶(E.COLI LIGASE)加入无相应抗生素的Lb 200μl,混匀后,37℃水浴30~60min。
(6)分别取3组反应物各50μl在含相应抗生素的固体LB培养基平皿上涂布,室温下干燥,然后倒置于37℃温箱中培养过夜。
基因工程:有目的的通过分子克隆技术,人为的操作改造基因,改变生物遗传性状的系列过程。
大肠杆菌DNA连接酶(E.COLI LIGASE)载体:能在连接酶的作用下和外源DNA 片段连接并运送DNA 分子进入受体细胞的DNA 分子。
转化:指质粒DNA 或以它为载体构建的重组DNA 导入细菌的过程。
感染:以噬菌体、粘性质粒和真核细胞病毒为载体的重组DNA 分子,在体外经过包装成具有感染能力的病毒或噬菌体颗粒,才能感染适当的细胞,并在细胞内扩增。
转导:指以噬菌体为载体,大肠杆菌DNA连接酶(E.COLI LIGASE)在细菌之间转移DNA 的过程,有时也指在真核细胞之间通过逆转录病毒转移和获得细胞DNA 的过程。
转染:指病毒或以它为载体构建的重组子导入真核细胞的过程。
96孔板快速过滤质粒提取试剂盒:以快速过滤板与结合配合操作提取质粒DNA
D1097-01E-Z 96 Fastfilter Plasmid Kit(4x96)
D1097-02E-Z 96 Fastfilter Plasmid Kit(20x96)
产品编号产品名称
96孔板简单经济型质粒提取试剂盒:以一块过滤板式提取质粒DNA
D1095-01E-Z 96 SE Plasmid Kit(4x96)
D1095-02E-Z 96 SE Plasmid Kit(20x96)
Omega快速 无内毒素质粒抽提试剂盒系列
无内毒素小量质粒提取试剂盒 I/II:从培养过夜的菌液中提取30ug/70ug无内毒素质粒DNA
D6948-00Endo-free Plasmid Mini Kit I(5)
D6948-01Endo-free Plasmid Mini Kit I(50)
D6948-01*Endo-free Plasmid Mini Kit I(100)
更新时间:2024/3/23 17:27:28
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